Plásmido Doble Nickase (h) aggrecan: sc-400760-NIC

ACAN codifica agrecano, un proteoglicano mayoritario de sulfato de condroitina de la matriz extracelular del cartílago que se une al hialuronano y a la proteína de enlace para formar grandes agregados que confieren resistencia a la compresión. La síntesis, secreción y recambio del agrecano son componentes integrales de los programas de diferenciación de los condrocitos y de la homeostasis de la matriz, e interactúan con vías que regulan el ensamblaje y la remodelación de la matriz extracelular, incluidas las señales anabólicas y la escisión mediada por proteasas de las familias ADAMTS y MMP. La alteración de la expresión de ACAN o de la integridad del agrecano modifica la biomecánica del cartílago y la organización de la matriz, contribuyendo a fenotipos esqueléticos degenerativos y del desarrollo. Estas características hacen de ACAN una diana central para estudiar la biología del cartílago, la comunicación cruzada de señales de la matriz extracelular y los mecanismos de degradación de la matriz.

aggrecan El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACAN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACAN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACAN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACAN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.