Plasmide Double Nickase (h2) AGAT: sc-405809-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) AGAT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AGAT Double Nickase (h2) et le plasmide AGAT Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GATM. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) AGAT | sc-405809-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain GATM code la L-arginine:glycine amidinotransférase (AGAT), une enzyme mitochondriale qui catalyse la première étape irréversible de la biosynthèse de la créatine en convertissant l’arginine et la glycine en guanidinoacétate, soutenant ainsi le tamponnement énergétique cellulaire via le système créatine–phosphocréatine. L’activité d’AGAT relie le métabolisme des acides aminés à la fonction mitochondriale et aux voies bioénergétiques, influençant les tissus à forte demande en ATP et s’articulant avec les réseaux métaboliques de l’oxyde nitrique et du métabolisme à un carbone via la disponibilité des substrats. Les altérations génétiques de GATM sont associées à une déficience en créatine et à des phénotypes neurométaboliques, et des modifications d’expression ont été étudiées dans la physiologie rénale et musculaire ainsi que dans des réponses plus larges au stress métabolique. L’édition génomique de GATM dans des modèles cellulaires humains permet des études mécanistiques de la régulation de la voie de la créatine, du métabolisme mitochondrial et des relations génotype–phénotype, notamment la validation de variants et le développement de tests fonctionnels pour évaluer les flux métaboliques et l’homéostasie énergétique.
AGAT Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GATM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GATM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GATM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GATM.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.