AFG3L2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404565

Übersicht

AFG3L2 kodiert eine AAA+-Metalloprotease der inneren Mitochondrienmembran, die sich zum m-AAA-Proteasekomplex zusammenlagert und die Proteinkontrolle unterstützt, indem sie fehlgefaltete oder nicht korrekt assemblierte Membranproteine herauszieht und abbaut. Durch regulierte Proteolyse trägt AFG3L2 zur Aufrechterhaltung der Integrität der Atmungskette, der Biogenese mitochondrialer Ribosomen und der gesamten Kapazität der oxidativen Phosphorylierung bei und beeinflusst damit den zellulären Energiestoffwechsel und die Proteostase. Eine Störung der AFG3L2-Funktion beeinträchtigt die mitochondriale Dynamik und kann Stressantworten auslösen, die mit einer gestörten Bioenergetik verknüpft sind. Pathogene Varianten in AFG3L2 sind mit neurodegenerativen Phänotypen assoziiert, einschließlich spinocerebellärer Ataxie, was es zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung mitochondrialer Dysfunktion in neuronalen Modellen macht.

Das AFG3L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AFG3L2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AFG3L2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AFG3L2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AFG3L2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AFG3L2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AFG3L2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AFG3L2-Exone abzielen, die für die AFG3L2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AFG3L2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AFG3L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AFG3L2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AFG3L2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AFG3L2 HDR-Plasmid (h) und AFG3L2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AFG3L2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AFG3L2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.