Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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AFF4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406238
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AFF4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AFF4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AFF4 Anticuerpo (G-1): sc-390310
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AFF4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406238 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
AFF4 (miembro 4 de la familia AFF4/FMR2) codifica un regulador transcripcional nuclear que funciona como un componente central del Complejo de Superelongación (SEC), coordinando la transición de la ARN polimerasa II hacia una elongación productiva. A través de interacciones con factores de elongación como P-TEFb y proteínas ELL, AFF4 favorece la inducción rápida de genes que responden a estímulos e influye en programas transcripcionales asociados a la cromatina. El control de la elongación transcripcional dependiente de AFF4 contribuye a la regulación de la identidad celular, la proliferación y las vías de respuesta al estrés. La actividad desregulada del SEC y la alteración de los circuitos transcripcionales asociados a AFF4 son relevantes para programas de expresión génica oncogénicos y otras enfermedades impulsadas por una elongación aberrante de la ARN polimerasa II.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AFF4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AFF4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AFF4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AFF4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AFF4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AFF4 para la investigación de la señalización de AFF4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de AFF4 críticos para la función de AFF4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AFF4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AFF4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AFF4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AFF4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AFF4 (h) y el plásmido HDR AFF4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AFF4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AFF4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.