Plasmide Double Nickase (h) AF-6: sc-404503-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AF-6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AF-6 Double Nickase (h) et le plasmide AF-6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AFDN. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AF-6 Antibody (B-5): sc-74433
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AF-6 | sc-404503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AF-6 | sc-404503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AFDN code AF-6, une protéine adaptatrice contenant un domaine PDZ, concentrée au niveau des jonctions d’adhérence et des jonctions serrées, où elle relie les récepteurs d’adhésion cellulaire de la famille des nectines au cytosquelette d’actine. AF-6 coordonne l’assemblage des jonctions, l’intégrité des barrières épithéliales et endothéliales, ainsi que la polarité cellulaire, en intégrant des signaux issus des voies Rap1/Ras et des mécanismes de remodelage du cytosquelette. Par ses rôles dans l’inhibition de contact, la migration et la morphogenèse, AFDN est fréquemment étudié dans le contexte des altérations de l’architecture tissulaire et des phénotypes invasifs observés dans de nombreux types de cancers. La dérégulation de la signalisation jonctionnelle dépendante d’AF-6 est également pertinente en neurobiologie du développement et en biologie cardiovasculaire, où un contrôle précis de l’adhésion cellule–cellule et de la polarité est requis.
AF-6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AFDN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AFDN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AFDN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AFDN.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.