AdSS1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419030

Panoramica

Il gene murino Adssl1 codifica AdSS1, un enzima della famiglia delle adenilosuccinato sintasi che sostiene la biosintesi de novo delle purine catalizzando la formazione di adenilosuccinato, un passaggio chiave nella produzione di AMP. Attraverso il suo contributo all’omeostasi dei nucleotidi, AdSS1 aiuta a mantenere la sintesi di DNA/RNA, la carica energetica e la capacità proliferativa, collegandosi a programmi metabolici fondamentali che accoppiano la funzione mitocondriale e la crescita cellulare. Alterazioni del metabolismo delle purine possono compromettere la replicazione e le vie di risposta allo stress e sono frequentemente associate a disfunzioni metaboliche e a un controllo del ciclo cellulare modificato. In quanto paralogo arricchito nel muscolo all’interno della via, Adssl1 è rilevante per studiare la regolazione tessuto-specifica del flusso di nucleotidi e i suoi effetti a valle sulla bioenergetica e sulla fisiologia cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AdSS1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adssl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adssl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adssl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AdSS1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adssl1 per lo studio della segnalazione di AdSS1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adssl1 critici per la funzione di AdSS1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adssl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AdSS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AdSS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adssl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AdSS1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AdSS1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adssl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adssl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.