Plásmido Doble Nickase (h) AdoMetDC: sc-404514-NIC

AMD1 codifica la S-adenosilmetionina descarboxilasa humana (AdoMetDC), una enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de poliaminas que genera S-adenosilmetionina descarboxilada, utilizada para la producción de espermidina y espermina. Mediante la regulación de los reservorios intracelulares de poliaminas, AdoMetDC influye en la traducción, la organización de la cromatina, la replicación del ADN y la progresión del ciclo celular, vinculando la actividad de AMD1 con el control del crecimiento y las respuestas al estrés celular. La desregulación del metabolismo de poliaminas y las alteraciones en la expresión o actividad de AMD1 se han asociado con fenotipos proliferativos y con la reprogramación metabólica observada en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para la interrogación de vías. Como regulador clave del metabolismo, AMD1 se estudia comúnmente en relación con la ornitina descarboxilasa y con las rutas de catabolismo/transporte de poliaminas para cartografiar la retroalimentación homeostática y los efectos posteriores sobre la expresión génica.

AdoMetDC El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AMD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AMD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AMD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AMD1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.