Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adipsin (h): sc-401782

Présentation

Le facteur D du complément (CFD), également appelé adipsine, est une protéase à sérine qui régule la voie alterne du complément en clivant le facteur B lorsqu’il est lié au C3b, favorisant l’assemblage de la C3 convertase et amplifiant l’activation du complément. Chez l’humain, le CFD est fortement exprimé dans le tissu adipeux et fait le lien entre la surveillance immunitaire innée et l’homéostasie métabolique, en influençant le tonus inflammatoire et la signalisation des adipokines. Une activité altérée du CFD a été associée à une inflammation dérégulée dépendante du complément et a été étudiée dans le contexte du remodelage du tissu adipeux, de traits cardiométaboliques et de lésions tissulaires d’origine immunitaire. En tant qu’enzyme sécrétée, l’adipsine constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer les interactions entre la protéolyse du complément, les réseaux de cytokines et les réponses cellulaires au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adipsin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CFD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CFD, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CFD à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adipsin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CFD pour l'étude de la signalisation de Adipsin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CFD essentiels à la fonction de Adipsin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CFD pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adipsin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Adipsin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CFD. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adipsin plasmide HDR (h) et le Adipsin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CFD pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CFD définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.