Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADHγ: sc-402261-ACT

ADH1C code la sous-unité gamma de l’alcool déshydrogénase humaine (ADHγ), une oxydoréductase cytosolique dépendante du zinc qui catalyse la conversion, dépendante du NAD⁺, de l’éthanol et d’autres alcools à chaîne courte en leurs aldéhydes correspondants. Cette enzyme contribue au métabolisme hépatique et gastro-intestinal de l’alcool et intervient dans la gestion des rétinoïdes et des aldéhydes dérivés des lipides via l’interconversion alcool/aldéhyde et l’équilibre rédox. Des variations de l’expression ou de l’activité d’ADH1C peuvent moduler la production d’acétaldéhyde et le stress oxydatif, influençant la susceptibilité aux lésions tissulaires liées à l’alcool ainsi que des phénotypes métaboliques plus larges. Par conséquent, ADHγ est fréquemment étudiée dans des voies reliant le métabolisme des xénobiotiques, l’homéostasie rédox cellulaire et la signalisation inflammatoire.

ADHγ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADH1C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADHγ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADH1C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADH1C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADHγ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADH1C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADHγ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADHγ dans les cellules tumorales présentant une expression de ADH1C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.