Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403213

Übersicht

ADCY7 kodiert die Adenylatcyclase 7 (AC7), ein membranassoziiertes Enzym, das ATP in zyklisches AMP (cAMP) umwandelt. cAMP ist ein Second Messenger, der die Signalwege von Proteinkinase A (PKA) und EPAC, Transkriptionsprogramme sowie die Rückkopplungsregulation von Immun- und Entzündungsreaktionen steuert. AC7 wird nachgeschaltet von G‑Protein‑gekoppelten Rezeptoren über Gαs aktiviert und durch Gβγ sowie weitere regulatorische Einflüsse moduliert, wodurch stimulusabhängige cAMP-Dynamiken geprägt werden. In menschlichen Zellen beeinflusst ADCY7‑abhängige cAMP-Signalgebung die Zytokinproduktion, die Aktivierung von Leukozyten und zelluläre Stressantworten und verknüpft diesen Knotenpunkt mit Signalwegen, die für Entzündung und Wirtsabwehr relevant sind. Genetische Variation oder eine veränderte Regulation cAMP‑bildender Enzyme wurde mit einer erhöhten Anfälligkeit für entzündliche und metabolische Phänotypen in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen von AC7 in krankheitsrelevanten zellulären Kontexten unterstützt.

Das Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADCY7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADCY7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADCY7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADCY7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADCY7-Exone abzielen, die für die Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADCY7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADCY7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 HDR-Plasmid (h) und Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADCY7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADCY7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.