Plasmide CRISPR d'Activation (h) Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4: sc-403016-ACT

Le gène humain **ADCY4** code l’adénylate cyclase 4 (**AC4**), une enzyme associée à la membrane qui convertit l’ATP en AMP cyclique (AMPc) en aval de la signalisation des récepteurs couplés aux protéines G. En modulant les voies dépendantes de l’AMPc/PKA et d’EPAC, AC4 influence les cascades de phosphorylation, les programmes transcriptionnels et des réponses cellulaires telles que la sécrétion, le métabolisme et la signalisation inflammatoire. L’activité d’ADCY4 est intégrée à des signaux régulés par le calcium et par Gαs, ce qui façonne l’amplitude et la durée de la dynamique des seconds messagers selon les types cellulaires. Une régulation altérée des réseaux de signalisation de l’AMPc impliquant ADCY4 a été étudiée dans le contexte de traits cardiométaboliques et de processus liés à l’immunité, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études de voies.

Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADCY4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADCY4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADCY4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADCY4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Adenylate cyclase 4/AC4/ADCY4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADCY4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.