Plásmido CRISPR de Activación (h) Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3: sc-400407-ACT

El gen humano **ADCY3** codifica la **adenilato ciclasa 3 (AC3)**, una enzima asociada a membrana que convierte ATP en AMPc aguas abajo de la señalización mediada por GPCR. Al modular la señalización dependiente de AMPc/PKA y de EPAC, AC3 influye en programas transcripcionales, la actividad de canales iónicos y el metabolismo celular, con funciones destacadas en vías quimiosensoriales y en la señalización neuronal. Alteraciones en la expresión o la función de ADCY3 se han relacionado con fenotipos metabólicos, incluidos rasgos asociados a la obesidad y una homeostasis energética desregulada, y también se estudia en contextos en los que la señalización por AMPc afecta la inflamación y la regulación endocrina. Como regulador nodal de la dinámica de segundos mensajeros, ADCY3 es una diana útil para analizar respuestas de AMPc dependientes del estímulo y la comunicación cruzada entre vías.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADCY3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADCY3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADCY3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADCY3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 en células tumorales con expresión de ADCY3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.