Plásmido CRISPR de Activación (h) Adenosine A2B-R: sc-401402-ACT

ADORA2B codifica el receptor humano de adenosina A2B (A2B-R), un receptor acoplado a proteína G de baja afinidad que se induce en condiciones de hipoxia y de estrés inflamatorio, donde se acumula la adenosina extracelular. El A2B-R señaliza principalmente a través de Gs para elevar el AMPc y también puede acoplarse a Gq para movilizar el calcio intracelular, activando programas aguas abajo como PKA/CREB, MAPK/ERK y la señalización de PI3K. A través de estas vías, ADORA2B modula la función de barrera endotelial, las respuestas angiogénicas y fibróticas, y la producción de citocinas en compartimentos inmunitarios y estromales. La actividad desregulada de ADORA2B se ha asociado con estados inflamatorios crónicos, remodelado tisular impulsado por hipoxia y señalización en el microambiente tumoral, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudios de señalización de receptores y biología del microambiente.

Adenosine A2B-R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADORA2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adenosine A2B-R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADORA2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADORA2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adenosine A2B-R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADORA2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adenosine A2B-R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adenosine A2B-R en células tumorales con expresión de ADORA2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.