Particules Lentivirales d'Activation (h) Adenosine A2A-R: sc-400807-LAC

ADORA2A code le récepteur humain de l’adénosine A2A (A2A-R), un récepteur couplé aux protéines G qui signale principalement via Gs pour augmenter l’AMPc et activer des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA et de CREB. A2A-R intègre les signaux extracellulaires d’adénosine aux circuits neuromodulateurs et immunorégulateurs, modulant des processus tels que la libération de neurotransmetteurs, la plasticité synaptique et la production de médiateurs inflammatoires. L’activité du récepteur recoupe les voies MAPK/ERK, l’homéostasie calcique et la régulation des réseaux de cytokines, reliant l’expression d’ADORA2A aux réponses au stress et aux modifications du microenvironnement tissulaire. Une signalisation ADORA2A dérégulée a été étudiée dans des contextes incluant la neuroinflammation, la neurodégénérescence et l’immunosuppression associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour la cartographie des voies et la validation mécanistique de cibles dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales Adenosine A2A-R (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADORA2A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Adenosine A2A-R (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADORA2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Adenosine A2A-R. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADORA2A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.