Plásmido CRISPR de Activación (h) Adducin α: sc-401693-ACT

El gen humano **ADD1** codifica la **aducina alfa**, una proteína del esqueleto de membrana que tapa y agrupa filamentos de actina y promueve el ensamblaje de la red de espectrina–actina en la membrana plasmática. Mediante la regulación del remodelado del citoesqueleto, la estabilidad de las uniones célula–célula y la organización de la membrana, **ADD1** contribuye a la integridad de los eritrocitos y, de forma más amplia, al control de la forma y la motilidad celular. La fosforilación de la aducina por quinasas como **PKC** y vías de señalización asociadas a **Rho** modula su afinidad por la actina y la espectrina, vinculándola al control dinámico de la arquitectura cortical. Alteraciones genéticas y funcionales de **ADD1** se han asociado con cambios en la estabilidad de la membrana y en fenotipos de señalización relevantes para estudios de biología vascular, loci de riesgo de hipertensión y mecanismos del citoesqueleto implicados en enfermedades complejas.

Adducin α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adducin α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adducin α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adducin α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adducin α en células tumorales con expresión de ADD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.