ADAR3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402742-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADAR3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADAR3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ADAR3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADARB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ADAR3: sc-73410
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADAR3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402742-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAR3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402742-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADARB2 kodiert ADAR3, ein im Gehirn angereichertes Mitglied der Familie der auf RNA wirkenden Adenosin-Deaminasen, das doppelsträngige RNA bindet und an der Regulation der RNA-Struktur sowie der posttranskriptionellen Genkontrolle beteiligt ist. Im Gegensatz zu den katalytisch aktiven ADAR1/ADAR2 wird ADAR3 häufig als editing-inaktiv beschrieben, kann jedoch A‑zu‑I‑RNA-Editing-Ergebnisse modulieren, indem es um dsRNA-Substrate konkurriert und dadurch editingabhängige Transkript-Recodierung, Spleißen, RNA-Stabilität und miRNA-Prozessierung beeinflusst. Über diese Mechanismen greift ADAR3 in neuronale Entwicklungsprozesse, synaptische Signalprogramme und angeborene RNA-Sensorik‑Signalwege ein, die auf endogene dsRNA reagieren. Eine veränderte ADARB2-Expression wurde in der Literatur mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen sowie mit dysregulierten RNA-Editing-Signaturen in neurologischen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht.
ADAR3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADARB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADARB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADARB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADARB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.