Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM7 (m2): sc-418992-KO-2

Présentation

Adam7 code ADAM7, un membre catalytiquement inactif de la famille ADAM (a disintegrin and metalloprotease) qui agit comme modulateur d’adhésion et de signalisation associé à la membrane plutôt que comme protéase. Chez la souris, ADAM7 est enrichie dans l’appareil reproducteur mâle et participe à la maturation des spermatozoïdes ainsi qu’aux interactions spermatozoïde–ovocyte via des interactions protéine–protéine et la coordination de complexes de récepteurs de surface cellulaire. Elle contribue à l’organisation membranaire et aux processus de communication cellule–cellule, en lien avec des voies impliquées dans les interactions avec la matrice extracellulaire et la dynamique d’adhésion cellulaire. La dérégulation des membres de la famille ADAM est largement associée à des altérations du remodelage tissulaire et de la signalisation inflammatoire, ce qui fait d’Adam7 un locus utile pour des études mécanistiques en biologie de la reproduction et sur les réseaux de signalisation à la surface cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM7 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adam7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adam7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adam7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adam7 pour l'étude de la signalisation de ADAM7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adam7 essentiels à la fonction de ADAM7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adam7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADAM7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adam7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM7 plasmide HDR (m) et le ADAM7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adam7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adam7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.