ADAM10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400883-ACT

ADAM10 は、ADAM（a disintegrin and metalloprotease）ファミリーに属する膜結合型メタロプロテアーゼをコードしており、多様な細胞表面タンパク質のエクトドメイン・シェディングを担う主要な α-セクレターゼとして機能する。NOTCH 受容体／リガンド、カドヘリン、サイトカイン受容体、アミロイド前駆体タンパク質（APP）などの基質を切断・処理することで、ADAM10 は複数組織にわたり、細胞運命決定、接着、遊走、炎症性シグナル伝達に影響を及ぼす。ADAM10 によるタンパク質分解は Notch シグナルの動態や膜受容体の利用可能性を調節し、下流の転写プログラムや細胞間コミュニケーションを形成する。ADAM10 活性の破綻は、神経変性、がん生物学、免疫調節異常に関与するシグナルネットワークの病的リモデリングと関連づけられており、プロテアーゼ依存的な経路制御の機構研究における有用な標的となっている。

ADAM10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADAM10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAM10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADAM10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADAM10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAM10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADAM10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAM10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADAM10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAM10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。