Plásmido Doble Nickase (h) ACTR-IIA: sc-402524-NIC

ACVR2A codifica el receptor de activina tipo IIA (ACTR-IIA), un receptor transmembrana con actividad quinasa de serina/treonina que se une a activinas y a ligandos relacionados de la superfamilia del TGF-β para iniciar la señalización mediada por SMAD2/3. Mediante la formación de complejos receptores con receptores de tipo I, ACTR-IIA regula programas transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación y la apoptosis celulares, la dinámica epitelio‑mesénquima y la homeostasis de la matriz extracelular. La señalización dependiente de ACVR2A contribuye al desarrollo tisular y a la regulación inmunitaria e inflamatoria, y las alteraciones de la vía se estudian con frecuencia en el contexto de una señalización TGF‑β/activina desregulada. Se han descrito alteraciones genéticas y de señalización que implican a ACVR2A en múltiples contextos asociados a enfermedad, incluidos cánceres y trastornos gastrointestinales, lo que respalda su utilidad como nodo para investigar mecanismos de vías de señalización.

ACTR-IIA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACVR2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACVR2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACVR2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACVR2A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.