Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTL7B (m): sc-418970

Présentation

Actl7b code pour ACTL7B, une protéine de type actine enrichie dans le testicule, impliquée dans le remodelage du cytosquelette au cours de la différenciation des spermatides et de la morphogenèse des spermatozoïdes. En tant que membre de la famille des actines, ACTL7B est associée à des processus qui façonnent le complexe acrosome–noyau et soutiennent l’organisation de structures dépendantes des microfilaments, nécessaires à la motilité et à la compétence de fécondation. Une perturbation de la dynamique de l’actine dans les cellules germinales est associée à une formation anormale de la tête des spermatozoïdes, à une diminution de la fonction spermatique et à des phénotypes de subfertilité mâle. Actl7b constitue donc un point d’entrée utile pour étudier la régulation du cytosquelette, la spermiogenèse et les réseaux de gènes qui gouvernent l’aptitude reproductive dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTL7B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Actl7b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Actl7b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Actl7b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTL7B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Actl7b pour l'étude de la signalisation de ACTL7B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Actl7b essentiels à la fonction de ACTL7B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Actl7b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTL7B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTL7B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Actl7b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTL7B plasmide HDR (m) et le ACTL7B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Actl7b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Actl7b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.