ACTL7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418969

Übersicht

Actl7a kodiert ACTL7A, ein aktinähnliches Protein mit angereicherter Expression in der männlichen Keimbahn, das während der Spermatiden-Differenzierung zum zytoskelettalen Umbau beiträgt. ACTL7A steht mit aktinbasierten Prozessen in Verbindung, die die Architektur des Spermatidenkopfes, die Akrosombildung und den Aufbau des perinukleären Zytoskeletts formen und damit die für die Spermienreifung erforderlichen strukturellen Veränderungen koordinieren. Störungen dieser zytoskelettalen Programme können die Spermiogenese beeinträchtigen, die Spermienfunktion verringern und in Modellsystemen zu Phänotypen männlicher Unfruchtbarkeit beitragen. Als testisdominantes Mitglied der Aktin-Familie wird Actl7a häufig in Signalwegen untersucht, die die Keimzellentwicklung und die reproduktive Fitness steuern.

Das ACTL7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Actl7a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Actl7a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Actl7a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACTL7A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Actl7a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACTL7A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Actl7a-Exone abzielen, die für die ACTL7A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Actl7a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACTL7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACTL7A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Actl7a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACTL7A HDR-Plasmid (m) und ACTL7A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Actl7a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Actl7a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.