Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
ACTG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418967
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ACTG1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ACTG1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: γ-Actin Anticuerpo (1-17): sc-65638
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ACTG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-418967 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Actg1 codifica la γ-actina citoplasmática (ACTG1), una isoforma de actina altamente conservada que se polimeriza en microfilamentos para sostener la forma celular, la adhesión y la integridad mecánica. La dinámica de ACTG1 coordina la remodelación de actina con procesos como la citocinesis, la migración celular y el tráfico vesicular, y se integra con vías de señalización que regulan el recambio del citoesqueleto, incluidas redes dependientes de las GTPasas de la familia Rho. En células de ratón, Actg1 contribuye a la morfogénesis tisular y al mantenimiento de la arquitectura epitelial y mesenquimal al modular la tensión cortical y la organización actomiosínica. La homeostasis de actina desregulada y la función alterada de ACTG1 son relevantes para estudios de fenotipos del desarrollo, mecanotransducción y disfunción del citoesqueleto asociada a enfermedades que afecta la motilidad celular y las propiedades de barrera.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTG1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Actg1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Actg1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Actg1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTG1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Actg1 para la investigación de la señalización de ACTG1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Actg1 críticos para la función de ACTG1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Actg1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ACTG1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACTG1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Actg1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTG1 (m) y el plásmido HDR ACTG1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Actg1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Actg1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.