ACSVL6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405327

Übersicht

SLC27A5 kodiert das humane Enzym Acyl‑CoA‑Synthetase Very Long‑Chain Family Member 6 (ACSVL6), das langkettige Fettsäuren aktiviert, indem es sie in Acyl‑CoA‑Thioester umwandelt. Diese Reaktion unterstützt die Lipidaufnahme und den intrazellulären Transport in die mitochondriale und peroxisomale β‑Oxidation und liefert zugleich Acyl‑CoA‑Substrate für die lipidbezogene Umgestaltung von Triglyzeriden, Phospholipiden und Gallensäuren. Über diese Funktionen trägt ACSVL6 zur metabolischen Homöostase bei und steht mit Signalwegen in Verbindung, die Energiebilanz, Membranzusammensetzung und Lipidsignalisierung steuern. Eine veränderte Fettsäureaktivierung und der nachgeschaltete Lipidfluss werden häufig mit metabolischer Dysfunktion und leberassoziierten Phänotypen in Zusammenhang gebracht, wodurch SLC27A5 ein geeignetes Ziel für mechanistische Studien des Lipidstoffwechsels ist.

Das ACSVL6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC27A5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC27A5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC27A5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACSVL6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC27A5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACSVL6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC27A5-Exone abzielen, die für die ACSVL6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC27A5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACSVL6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ACSVL6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC27A5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACSVL6 HDR-Plasmid (h) und ACSVL6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC27A5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC27A5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.