Plásmido Doble Nickase (m) ACSVL1: sc-424084-NIC

Slc27a2 codifica la sintetasa de acil‑CoA de ácidos grasos de cadena muy larga 1 (ACSVL1), una enzima asociada al retículo endoplásmico (RE) y a los peroxisomas que activa ácidos grasos de cadena larga y muy larga convirtiéndolos en sus tioésteres acil‑CoA. Esta reacción constituye un punto de entrada clave para las vías de utilización de lípidos, ya que conecta la captación de ácidos grasos con la β‑oxidación, la remodelación lipídica y la homeostasis energética, y favorece la coordinación metabólica entre peroxisomas y mitocondrias. En células de ratón, la actividad de ACSVL1 influye en los reservorios intracelulares de lípidos bioactivos que pueden modular la señalización de PPAR y programas transcripcionales metabólicos más amplios. La desregulación del manejo de ácidos grasos de cadena muy larga es relevante en estudios sobre esteatosis hepática, resistencia a la insulina y fenotipos neurometabólicos en los que se investigan de forma mecanística la acumulación de lípidos y el estrés oxidativo.

ACSVL1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Slc27a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Slc27a2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Slc27a2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Slc27a2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.