Partículas Lentivirales de Activación (m2) ACSL4: sc-424503-LAC-2

El gen Acsl4 de ratón codifica la acil‑CoA sintetasa de cadena larga, miembro 4 (ACSL4), una enzima del metabolismo lipídico que activa ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga, como el ácido araquidónico, convirtiéndolos en acil‑CoA, lo que modula la composición de los fosfolípidos de membrana y la biosíntesis posterior de eicosanoides. ACSL4 actúa en la intersección entre la captación de ácidos grasos, la remodelación de fosfolípidos y la homeostasis redox, y se utiliza ampliamente como determinante molecular de la sensibilidad a la ferroptosis debido a su papel en la generación de fosfolípidos que contienen PUFA susceptibles de oxidación. La alteración de la actividad de ACSL4 se ha vinculado con una señalización lipídica desregulada y respuestas al estrés oxidativo en modelos de neurodegeneración, disfunción metabólica, inflamación y vías relevantes para el cáncer. La edición génica dirigida a Acsl4 permite estudios mecanísticos del flujo lipídico, la muerte celular ferroptótica y la remodelación de membranas en distintos tipos celulares y en sistemas murinos in vivo.

Las partículas de activación lentiviral ACSL4 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Acsl4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ACSL4 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Acsl4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ACSL4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Acsl4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.