ACSL4 Double Nickase Plasmid (m): sc-424503-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSL4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSL4 Double-Nickase-Plasmid (m) und ACSL4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Acsl4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSL4: sc-365230
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSL4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL4 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Acsl4** kodiert die Acyl-CoA-Synthetase der Long-Chain-Familie, Mitglied 4 (ACSL4), ein Enzym, das mehrfach ungesättigte langkettige Fettsäuren wie Arachidonsäure und Adreninsäure in ihre Acyl-CoA-Derivate umwandelt, damit sie in Membranphospholipide eingebaut werden können. Durch die Prägung des Phospholipid-Remodelings und der Verfügbarkeit von Lipidmediatoren beeinflusst ACSL4 die Empfindlichkeit gegenüber Ferroptose, den oxidativen Lipidstoffwechsel sowie Membrandynamiken, die mit zellulären Stressantworten verknüpft sind. Die ACSL4-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die Lipidperoxidation und inflammatorische Signalübertragung regulieren, und eine veränderte Expression oder Funktion wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, metabolischer Dysregulation sowie kontextabhängigen Veränderungen der Tumorbiologie in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen **Acsl4** zu einem nützlichen Ziel, um lipidgetriebene Mechanismen von Zelltod, Redox-Homöostase und Membranzusammensetzung in Maus-Modellsystemen zu untersuchen.
ACSL4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Acsl4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Acsl4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Acsl4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Acsl4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.