Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACRV1 (m): sc-418963

Présentation

Acrv1 code la protéine 1 de la vésicule acrosomique (ACRV1), un composant du spermatozoïde enrichi dans le testicule, localisé dans l’acrosome, qui contribue à la biogenèse de l’acrosome et à l’architecture moléculaire nécessaire à la fécondation. Dans les spermatides de souris, ACRV1 participe aux étapes tardives de la spermiogenèse, notamment la formation de l’acrosome, le remodelage de la tête du spermatozoïde et des événements de maturation qui influencent les interactions avec la zone pellucide et la réaction acrosomique. La dérégulation des protéines acrosomiques est associée à une diminution de la fonction spermatique et à des phénotypes de sous-fertilité masculine, ce qui fait d’Acrv1 un point d’entrée génétique utile pour l’étude de la biologie de la reproduction. Ce gène est fréquemment utilisé pour analyser les programmes de différenciation des cellules germinales et les voies liées à l’acrosome qui sous-tendent la qualité du sperme et la compétence à la fécondation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACRV1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acrv1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acrv1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acrv1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACRV1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acrv1 pour l'étude de la signalisation de ACRV1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acrv1 essentiels à la fonction de ACRV1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acrv1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACRV1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACRV1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acrv1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACRV1 plasmide HDR (m) et le ACRV1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acrv1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acrv1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.