Acrp30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418962

Panoramica

Adipoq codifica Acrp30 (adiponectina), un ormone secreto dagli adipociti che circola in forma di multimeri e regola l’equilibrio energetico sistemico. Acrp30 segnala principalmente attraverso ADIPOR1/ADIPOR2 per modulare le vie di AMPK e PPARα, influenzando l’ossidazione degli acidi grassi, l’utilizzo del glucosio e la biogenesi mitocondriale; può inoltre plasmare il tono infiammatorio tramite effetti sulla segnalazione associata a NF-κB. Nei modelli murini, un’espressione alterata di Adipoq è associata a disfunzione del tessuto adiposo, insulino-resistenza, steatosi epatica e fenotipi correlati all’aterosclerosi. Queste proprietà rendono Adipoq un nodo chiave per lo studio della segnalazione delle adipokine, del crosstalk metabolico tra tessuto adiposo e fegato/muscolo e dell’integrazione tra infiammazione e metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Acrp30 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adipoq in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adipoq insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adipoq a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Acrp30.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adipoq per lo studio della segnalazione di Acrp30, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adipoq critici per la funzione di Acrp30
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adipoq per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Acrp30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Acrp30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adipoq. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Acrp30 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Acrp30 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adipoq per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adipoq definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.