Plásmido CRISPR de Activación (h) Acrp30: sc-401327-ACT

ADIPOQ codifica la adipocina Acrp30 (adiponectina), una proteína secretada producida principalmente por los adipocitos que circula en forma de complejos multiméricos y regula la homeostasis energética sistémica. Acrp30 se une a receptores como ADIPOR1/ADIPOR2 para modular las vías de señalización de AMPK y PPARα, promoviendo la oxidación de ácidos grasos, la utilización de glucosa y programas antiinflamatorios en tejidos metabólicos. Las alteraciones en la expresión de ADIPOQ y en la señalización de la adiponectina se asocian con resistencia a la insulina, disfunción metabólica relacionada con la obesidad, enfermedad del hígado graso no alcohólico y fenotipos de riesgo cardiovascular. En modelos celulares, ADIPOQ se utiliza para estudiar la diferenciación de adipocitos, la secreción de adipocinas y la comunicación entre el tejido adiposo y las vías hepáticas, musculares e inmunitarias.

Acrp30 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADIPOQ sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Acrp30 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADIPOQ en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADIPOQ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Acrp30. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADIPOQ y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Acrp30 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Acrp30 en células tumorales con expresión de ADIPOQ silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.