acrogranin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420696

Übersicht

Grn kodiert Acrogranin (Progranulin), ein sezerniertes und lysosomenassoziiertes Glykoprotein, das Zellwachstum, Überleben und entzündliche Signalübertragung in verschiedenen Geweben moduliert. In der Maus ist Acrogranin an der endolysosomalen Homöostase und der Proteostase beteiligt und kann Signalwege beeinflussen, die mit Mikroglia-Aktivierung, Zytokinnetzwerken und dem Umbau der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Eine veränderte GRN-/Acrogranin-Funktion wurde mit Neurodegeneration, fehlgeleiteten Immunantworten und Phänotypen der Gewebereparatur in Verbindung gebracht, was Grn zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Neuroinflammation und der Biologie lysosomalen Stresses macht. Grn-abhängige Prozesse sind zudem für Modelle des metabolischen und fibrotischen Remodelings relevant, in denen sezernierte Wachstumsfaktoren und lysosomale Funktion zusammenwirken.

Das acrogranin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Grn-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Grn-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Grn nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die acrogranin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Grn-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der acrogranin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Grn-Exone abzielen, die für die acrogranin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Grn-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom acrogranin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom acrogranin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Grn-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das acrogranin HDR-Plasmid (m) und acrogranin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Grn-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Grn-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.