acrogranin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401924-ACT

O GRN codifica a acrogranina (progranulina), uma glicoproteína secretada que sustenta o crescimento e a sobrevivência celular, bem como a remodelação tecidual, por meio da modulação da sinalização inflamatória e da atividade de proteases no meio extracelular. A acrogranina influencia a homeostase lisossomal e o tráfego endossomal, e a sua clivagem em granulin as pode remodelar respostas de citocinas e programas celulares de estresse. No sistema nervoso, contribui para a função da micróglia, a manutenção sináptica e a resiliência neuronal, enquanto em tecidos periféricos afeta a reparação de feridas e as interações estroma–epitélio. A expressão desregulada de GRN ou a haploinsuficiência está associada à neurodegeneração e à disfunção imune, e a sinalização alterada da progranulina também é estudada em oncologia e biologia da fibrose como reguladora de proliferação e inflamação.

acrogranin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

acrogranin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de acrogranin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de acrogranin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via acrogranin em células tumorais com expressão de GRN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.