Plasmide Double Nickase (h) ACLP/AEBP1: sc-403540-NIC

AEBP1 code la protéine 1 de liaison à l’« adipocyte enhancer », également appelée ACLP, une protéine sécrétée et associée à la matrice extracellulaire, qui se lie au collagène et contribue à l’assemblage de la matrice, au remodelage tissulaire et à l’adhérence cellule–matrice. Dans les contextes stromaux et mésenchymateux, AEBP1 est associée à des programmes de signalisation pro-fibrotiques et inflammatoires, influençant l’activation des fibroblastes, la réparation des plaies et l’organisation de la matrice extracellulaire vasculaire. Des altérations de l’expression d’AEBP1/ACLP ont été rapportées dans diverses affections fibrosantes ainsi que dans de multiples microenvironnements tumoraux, où elles sont corrélées à des modifications de la composition du stroma, de l’invasivité et de la modulation immunitaire. Ces caractéristiques font d’AEBP1 une cible utile pour étudier la biologie de la matrice extracellulaire, le dialogue fibroblastes–système immunitaire et les voies de remodelage qui façonnent l’homéostasie tissulaire et la progression des maladies.

ACLP/AEBP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AEBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AEBP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AEBP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AEBP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.