Plásmido Doble Nickase (h) Acid Ceramidase: sc-401495-NIC

ASAH1 codifica la ceramidasa ácida, una hidrolasa lisosomal que escinde la ceramida en esfingosina y un ácido graso libre, conectando el catabolismo de los esfingolípidos con la señalización mediada por esfingosina-1-fosfato. Al regular el “reóstato” ceramida–esfingosina, la ceramidasa ácida influye en el recambio de membranas, la homeostasis lisosomal, la autofagia y vías sensibles al estrés que determinan la supervivencia celular y la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de ASAH1 altera el equilibrio de esfingolípidos y se ha asociado con patología por almacenamiento lisosomal y fenotipos neurodegenerativos, así como con una señalización lipídica alterada en modelos de cáncer y de estrés metabólico. Por ello, ASAH1 se estudia ampliamente en el contexto de la señalización mediada por lípidos, el control de calidad de los orgánulos y la modulación, impulsada por esfingolípidos, de las decisiones sobre el destino celular.

Acid Ceramidase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ASAH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ASAH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ASAH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ASAH1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.