Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACCβ: sc-401903-ACT

ACACB code l’acétyl‑CoA carboxylase bêta (ACCβ), une enzyme biotine‑dépendante associée aux mitochondries qui catalyse la formation de malonyl‑CoA, un régulateur clé de l’oxydation des acides gras à longue chaîne. En modulant les niveaux de malonyl‑CoA, ACCβ contrôle l’activité de CPT1 et influe sur l’équilibre entre la synthèse des acides gras et la β‑oxydation, reliant ainsi le métabolisme lipidique à l’homéostasie énergétique cellulaire. L’activité d’ACACB est intégrée à des voies de détection des nutriments, notamment la signalisation AMPK, et répond à l’état métabolique dans le foie, le muscle et d’autres tissus oxydatifs. Une dérégulation du flux lipidique associé à ACCβ a été reliée à des phénotypes métaboliques pertinents pour la résistance à l’insuline, la dyslipidémie et la stéatose hépatique, ce qui étaye des études mécanistiques en biologie des maladies métaboliques.

ACCβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACACB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACCβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACACB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACACB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACCβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACACB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACCβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACCβ dans les cellules tumorales présentant une expression de ACACB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.