ACADS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418940

Übersicht

Acads kodiert die kurzkettige Acyl‑CoA‑Dehydrogenase (ACADS), ein mitochondriales Flavoprotein, das den ersten Dehydrierungsschritt der β‑Oxidation kurzkettiger Fettsäuren katalysiert. Durch die Unterstützung der Acetyl‑CoA‑Bildung und des nachgeschalteten Flusses durch den TCA‑Zyklus (Citratzyklus) trägt ACADS dazu bei, die Energiehomöostase während des Fastens und bei hoher Fettnutzung aufrechtzuerhalten, und ist über den FAD‑abhängigen Elektronentransfer in die Redoxbalance eingebunden. Eine Störung der ACADS‑Aktivität wird mit der Anreicherung kurzkettiger Acyl‑CoAs und veränderten Acylcarnitin‑Profilen in Verbindung gebracht, was ACADS für angeborene Störungen der Fettsäureoxidation und Phänotypen metabolischen Stresses relevant macht. In Mausmodellen wird Acads häufig in Leber, Herz, Skelettmuskel und braunem Fettgewebe untersucht, um den mitochondrialen Stoffwechsel, die Nährstoffsensorik und die systemische Energiebilanz zu verstehen.

Das ACADS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acads-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acads-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acads nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACADS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acads-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACADS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acads-Exone abzielen, die für die ACADS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acads-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACADS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACADS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acads-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACADS HDR-Plasmid (m) und ACADS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acads-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acads-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.