Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACAD-11: sc-408606-ACT

Le gène humain **ACAD11** code l’acyl-CoA déshydrogénase, membre 11 de la famille (ACAD-11), une enzyme mitochondriale impliquée dans l’initiation de la β‑oxydation des acides gras par déshydrogénation dépendante du FAD de substrats acyl‑CoA spécifiques. En contribuant au catabolisme mitochondrial des lipides, ACAD-11 influence l’équilibre énergétique cellulaire, l’homéostasie redox et des voies de signalisation lipidique qui s’articulent avec des programmes métaboliques régulés par les PPAR. Une expression ou une activité altérée d’ACAD11 est donc pertinente dans les études portant sur le dysfonctionnement mitochondrial, l’accumulation lipidique et les réponses au stress métabolique. En recherche biomédicale, ACAD11 est fréquemment évalué dans des contextes reliant la capacité d’oxydation des acides gras à l’inflammation, à la neurobiologie et à des phénotypes associés aux maladies métaboliques.

ACAD-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACAD11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACAD-11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACAD11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACAD11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACAD-11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACAD11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACAD-11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACAD-11 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACAD11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.