ABCG5 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424275-ACT

Das Mausgen *Abcg5* kodiert den ATP-bindenden Kassettentransporter ABCG5, der mit ABCG8 ein Heterodimer bildet und den Sterol-Efflux über apikale Membranen in Enterozyten und Hepatozyten vermittelt. Dieser Transporterkomplex begrenzt die intestinale Aufnahme von Nahrungssterolen und fördert die biliäre Sekretion von Cholesterin und pflanzlichen Sterolen; dabei ist er in Signalwege der Lipidhomöostase eingebunden, zu denen auch die Regulation durch nukleäre Rezeptoren und der Gallensäurestoffwechsel gehören. Eine Störung des ABCG5-abhängigen Transports verändert den Steroltransport und trägt zu dyslipidämieassoziierten Phänotypen bei, wodurch *Abcg5* ein relevantes Ziel für die Untersuchung der Kontrolle des Lipidgleichgewichts entlang der Darm-Leber-Achse ist. In-vivo- und In-vitro-Modelle, die auf einer Modulation von *Abcg5* beruhen, unterstützen mechanistische Untersuchungen zu metabolischem Stress, hepatischem Lipidhandling und sterolgetriebenen Entzündungsreaktionen.

ABCG5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Abcg5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABCG5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Abcg5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Abcg5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABCG5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Abcg5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABCG5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABCG5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Abcg5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.