Plásmido CRISPR de Activación (h) ABCG5: sc-402729-ACT

ABCG5 codifica un transportador de la familia ATP-binding cassette (ABC) que forma un heterodímero con ABCG8 para mediar el eflujo de esteroles a través de la membrana apical de los enterocitos y de la membrana canalicular de los hepatocitos. Este complejo transportador limita la absorción intestinal de esteroles de la dieta y promueve la secreción biliar de colesterol y esteroles vegetales, lo que contribuye a la homeostasis lipídica del organismo. La actividad de ABCG5 se integra con las vías hepáticas e intestinales de manejo de esteroles, incluidos los programas transcripcionales regulados por LXR y el metabolismo de los ácidos biliares. La disfunción genética o la reducción de la expresión de ABCG5 se asocia con fenotipos de acumulación de esteroles, como la sitosterolemia, y puede influir en modelos de investigación relacionados con la dislipidemia.

ABCG5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCG5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABCG5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCG5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCG5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABCG5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCG5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABCG5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABCG5 en células tumorales con expresión de ABCG5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.