Plásmido CRISPR de Activación (h) ABCG2: sc-416737-ACT

ABCG2 (miembro 2 de la subfamilia G de transportadores ABC, por sus siglas en inglés) es un transportador de eflujo de la membrana plasmática que utiliza la hidrólisis de ATP para exportar una amplia gama de metabolitos endógenos y xenobióticos. Se expresa en niveles altos en tejidos de barrera y en compartimentos celulares con características de células madre, donde contribuye al fenotipo de “población lateral” (side population) y regula la acumulación intracelular de moléculas pequeñas. La actividad de ABCG2 se relaciona con procesos de desintoxicación y de estrés oxidativo, influyendo en la homeostasis celular ante desafíos metabólicos y ambientales. La alteración de la expresión o la función de ABCG2 se asocia con variabilidad en la disposición de fármacos y se ha estudiado en biología del cáncer y en contextos de protección tisular, donde el eflujo mediado por transportadores determina la sensibilidad celular a agentes químicos estresores.

ABCG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABCG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABCG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABCG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABCG2 en células tumorales con expresión de ABCG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.