ABCG2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416737-ACT

ABCG2（ATP-binding cassetteサブファミリーGメンバー2）は、ATP加水分解のエネルギーを利用して、幅広い内因性代謝産物や外来性化合物（キセノバイオティクス）を細胞外へ排出する、形質膜上の排出トランスポーターです。バリア組織および幹細胞様の細胞集団で高発現しており、「サイドポピュレーション」表現型に寄与するとともに、小分子の細胞内蓄積を制御します。ABCG2の活性は解毒や酸化ストレス関連プロセスとも交差し、代謝的・環境的な負荷下での細胞恒常性に影響を与えます。ABCG2の発現や機能の変化は薬物動態の個体差と関連しており、トランスポーター介在性の排出が化学的ストレス因子に対する細胞感受性を左右することから、がん生物学や組織保護の文脈でも研究されています。

ABCG2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCG2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCG2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCG2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCG2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCG2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCG2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。