ABCG1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-418933-ACT

Das Mausgen *Abcg1* kodiert den ATP-bindenden Kassettentransporter ABCG1, einen zentralen Regulator der intrazellulären Lipidhomöostase, der den Efflux von Cholesterin und Phospholipiden zu HDL fördert und zur Aufrechterhaltung der Membranzusammensetzung beiträgt. Die ABCG1-Aktivität greift in LXR/RXR-gesteuerte Transkriptionsprogramme ein und prägt die Biologie von Makrophagen-Schaumzellen, entzündliche Signalwege sowie die Lipidverarbeitung in Immun- und Stoffwechselgeweben. Neben seinen Funktionen in Makrophagen trägt ABCG1 auch zum Gleichgewicht des pulmonalen Surfactants und zu zellulären Antworten auf oxidativen und metabolischen Stress bei. Eine fehlregulierte ABCG1-Expression oder -Funktion ist daher für Studien zu atherosklerosebezogenen Signalwegen, metabolischer Inflammation und Störungen des Lungenlipidstoffwechsels in Mausmodellen relevant.

ABCG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Abcg1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABCG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Abcg1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Abcg1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABCG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Abcg1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABCG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABCG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Abcg1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.