Plásmido CRISPR de Activación (h) ABCB5: sc-404392-ACT

ABCB5 codifica un transportador de la superfamilia ATP-binding cassette (ABC) implicado en el eflujo transmembrana dependiente de ATP de pequeñas moléculas y xenobióticos, lo que vincula su actividad con la detoxificación celular y la homeostasis del transporte de membrana. En tejidos humanos, la expresión de ABCB5 se ha asociado con programas celulares de tipo madre y con la regulación de la distribución intracelular de fármacos, con efectos posteriores sobre la señalización de respuesta al estrés, el estado de diferenciación y las vías de supervivencia. Se ha descrito una expresión desregulada de ABCB5 en múltiples contextos de cáncer y se estudia por su relación con la plasticidad de las células tumorales, fenotipos asociados a quimiorresistencia y la biología del linaje de melanocitos. Estas características hacen de ABCB5 una diana útil para investigar la regulación del estado celular y de la respuesta a estresores ambientales o metabólicos mediada por transportadores.

ABCB5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCB5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABCB5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCB5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCB5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABCB5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCB5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABCB5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABCB5 en células tumorales con expresión de ABCB5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.