ABCB5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404392-ACT

ABCB5は、ATP依存的に小分子や異物（キセノバイオティクス）を細胞膜を介して外排出するATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードしており、その活性は細胞の解毒機構や膜輸送の恒常性維持と関連づけられています。ヒト組織では、ABCB5の発現は幹細胞様の細胞プログラムや細胞内薬物分布の制御と関連しており、その下流でストレス応答シグナル伝達、分化状態、生存経路に影響を及ぼすことが示されています。ABCB5の発現異常は複数のがん種で報告されており、腫瘍細胞の可塑性、化学療法抵抗性に関連する表現型、ならびにメラノサイト系譜の生物学との関係が研究されています。これらの特徴から、ABCB5はトランスポーターを介した細胞状態の制御や、環境的・代謝的ストレッサーに対する応答を検討するための有用な標的となります。

ABCB5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCB5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCB5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCB5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCB5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCB5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCB5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCB5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCB5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCB5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。