ABCA7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403762-ACT

ABCA7 (ATP-bindende Kassettentransporter, Unterfamilie A, Mitglied 7) ist ein humaner Lipidtransporter, der über ATP-abhängigen transmembranären Transport an der Homöostase von Phospholipiden und Cholesterin beteiligt ist. Er ist vor allem in Immun- und neuronalen Kontexten angereichert, wo er Membranumbau, endozytotischen Transport und phagozytäre Clearance unterstützt und damit die Lipidverarbeitung mit der angeborenen Immun-Signalgebung sowie zellulären Stressantworten verknüpft. Die ABCA7-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die Vesikeldynamik und die Zusammensetzung von Lipid Rafts steuern, und beeinflusst dadurch Rezeptorsignale und die Antigenprozessierung. Genetische und funktionelle Studien bringen ABCA7 mit einer erhöhten Anfälligkeit für neurodegenerative Erkrankungen und veränderter amyloidbezogener Verarbeitung in Zusammenhang, was es für mechanistische Arbeiten in mikrogliaähnlichen Modellen und neuronalen Systemen relevant macht.

ABCA7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABCA7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABCA7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABCA7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABCA7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABCA7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABCA7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABCA7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABCA7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABCA7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.