ABCA5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410568-ACT

ABCA5 kodiert einen ATP-bindenden Kassettentransporter (ABC-Transporter) der ABCA-Subfamilie, der überwiegend an intrazellulären Membranen lokalisiert ist und zur ATP-abhängigen Lipidtranslokation beiträgt. Durch die Regulierung der intrazellulären Verarbeitung von Cholesterin und Sphingolipiden beeinflusst ABCA5 den endolysosomalen Transport, die Membranzusammensetzung und umfassendere Wege der Lipidhomöostase. Eine veränderte ABCA5-Expression wurde mit einer Dysregulation des Sterolstoffwechsels und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht; zudem wurde genetische Variation im Kontext komplexer Merkmale und lipidassoziierter Pathophysiologie untersucht. In Zellmodellen stellt ABCA5 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um aufzuklären, wie intrazellulärer Lipidtransport mit Organellenfunktion und metabolischer Signalübertragung verknüpft ist.

ABCA5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABCA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABCA5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABCA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABCA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABCA5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABCA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABCA5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABCA5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABCA5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.