Plásmido CRISPR de Activación (h) ABCA3: sc-402388-ACT

ABCA3 (miembro 3 de la subfamilia A de los transportadores de casete de unión a ATP) es un transportador de lípidos que se expresa predominantemente en las células epiteliales alveolares de tipo II, donde se localiza en los cuerpos lamelares y favorece el tráfico y el empaquetamiento de fosfolípidos del surfactante. Como transportador ABC dependiente de ATP, ABCA3 contribuye a la homeostasis intracelular de los lípidos de membrana y a procesos de transporte vesicular esenciales para la fisiología pulmonar. La alteración o disminución de la actividad de ABCA3 se asocia con un metabolismo del surfactante deteriorado y se ha vinculado con distrés respiratorio neonatal y con fenotipos de enfermedad pulmonar intersticial. Por ello, la biología de ABCA3 se estudia ampliamente en vías relacionadas con la biogénesis de los cuerpos lamelares, el procesamiento del surfactante y la diferenciación de células epiteliales y sus respuestas al estrés.

ABCA3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABCA3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABCA3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABCA3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABCA3 en células tumorales con expresión de ABCA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.