ABCA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405934

Descripción general

ABCA2 (miembro 2 de la subfamilia A de los transportadores de casete de unión a ATP) es un transportador de lípidos asociado a membrana que se localiza predominantemente en compartimentos endosómicos y lisosómicos, donde contribuye al tráfico intracelular de colesterol y esfingolípidos. Como transportador ABC, ABCA2 acopla la hidrólisis de ATP a la translocación de sustratos, influyendo en la dinámica vesicular, la composición de membranas y la homeostasis lipídica. La desregulación de la expresión de ABCA2 y las alteraciones en el manejo de lípidos se han vinculado con vías asociadas a la neurodegeneración, incluido el procesamiento de la proteína precursora de amiloide y el equilibrio lipídico neuronal. ABCA2 también se estudia en el contexto de respuestas celulares al estrés y fenotipos de transporte multidrogas, lo que la hace relevante para investigaciones mecanísticas en modelos de cáncer y del sistema nervioso.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ABCA2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ABCA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ABCA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ABCA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ABCA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ABCA2 para la investigación de la señalización de ABCA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ABCA2 críticos para la función de ABCA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ABCA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ABCA2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ABCA2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ABCA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ABCA2 (h) y el plásmido HDR ABCA2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ABCA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ABCA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.