Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABCA13: sc-407004-ACT

ABCA13 code un grand transporteur de la famille des cassettes de liaison à l’ATP (ABC), impliqué dans la translocation des lipides à travers les membranes cellulaires de manière dépendante de l’ATP, contribuant ainsi à l’organisation membranaire et au trafic intracellulaire. En tant que membre de la sous-famille ABCA, ABCA13 est associé aux processus de gestion des lipides et du cholestérol susceptibles d’influencer le transport vésiculaire, la dynamique endosomale–lysosomale et l’homéostasie des cellules épithéliales. Des altérations de l’expression d’ABCA13 ont été rapportées en biologie pulmonaire et ont été associées à des jeux de données liés au cancer et aux troubles neuropsychiatriques, ce qui motive l’étude de la façon dont le remodelage lipidique induit par les transporteurs affecte la signalisation et la différenciation cellulaire. Ces caractéristiques font d’ABCA13 une cible pertinente pour explorer les voies de transport des lipides, la signalisation dépendante de la composition membranaire et des programmes transcriptionnels liés aux maladies dans des modèles de cellules humaines.

ABCA13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCA13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABCA13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCA13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCA13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABCA13. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCA13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABCA13 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABCA13 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCA13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.