ABCA13 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407004-ACT

ABCA13 kodiert einen großen ATP-bindenden Kassettentransporter (ABC-Transporter), der an der ATP-abhängigen Translokation von Lipiden über Zellmembranen beteiligt ist und damit die Membranorganisation sowie den intrazellulären Transport unterstützt. Als Mitglied der ABCA-Subfamilie ist ABCA13 mit Prozessen der Lipid- und Cholesterinverarbeitung verknüpft, die den vesikulären Transport, die endosomal-lysosomale Dynamik und die Homöostase von Epithelzellen beeinflussen können. Eine veränderte ABCA13-Expression wurde in der Lungenbiologie beschrieben und in Datensätzen mit Bezug zu Krebs sowie neuropsychiatrischen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was Untersuchungen dazu motiviert, wie transportergetriebene Lipid-Remodellierung Signalwege und zelluläre Differenzierung beeinflusst. Diese Eigenschaften machen ABCA13 zu einem nützlichen Ziel für die Erforschung von Lipidtransportwegen, membrankompositionsabhängiger Signalübertragung und krankheitsrelevanter Transkriptionsprogramme in humanen Zellmodellen.

ABCA13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABCA13-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABCA13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABCA13-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABCA13-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABCA13-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABCA13-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABCA13-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABCA13-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABCA13-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.