Plasmide Double Nickase (h) AANAT: sc-403080-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AANAT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AANAT Double Nickase (h) et le plasmide AANAT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AANAT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AANAT | sc-403080-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AANAT | sc-403080-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AANAT (arylalkylamine N-acétyltransférase) humaine est l’enzyme limitante de la biosynthèse de la mélatonine ; elle catalyse l’acétylation de la sérotonine en N‑acétylsérotonine au sein de la voie métabolique du tryptophane/des indolamines. Son activité est étroitement régulée par les signaux circadiens et par la voie AMPc/PKA, notamment via une stabilisation dépendante de la phosphorylation et des interactions qui coordonnent la production nocturne de mélatonine. En contrôlant la mélatonine et des intermédiaires indolaminiques apparentés, l’AANAT contribue au rythme veille–sommeil et au timing neuroendocrinien, aux réponses au stress oxydatif et à l’homéostasie métabolique. Des altérations de l’expression ou de la régulation d’AANAT ont été étudiées dans le cadre de la perturbation des rythmes circadiens et de phénotypes liés au sommeil, ainsi que dans des contextes de recherche neuropsychiatrique et métabolique.
AANAT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AANAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AANAT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AANAT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AANAT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.