Plasmide Double Nickase (h) A20/TNFAIP3: sc-400447-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) A20/TNFAIP3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide A20/TNFAIP3 Double Nickase (h) et le plasmide A20/TNFAIP3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TNFAIP3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: A20/TNFAIP3 Antibody (A-12): sc-166692
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) A20/TNFAIP3 | sc-400447-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) A20/TNFAIP3 | sc-400447-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **TNFAIP3** code **A20**, une enzyme d’édition de l’ubiquitine qui agit comme un régulateur négatif majeur de la signalisation inflammatoire. A20 met fin à l’activation des voies **NF-κB** et **MAPK** en aval de récepteurs tels que **TNFR**, **IL-1R** et les **TLR**, en modulant les chaînes d’ubiquitine liées en **K63** et en **M1** sur des adaptateurs de signalisation, limitant ainsi la production de cytokines et empêchant des réponses excessives au stress cellulaire. En contrôlant les points de contrôle de l’apoptose et de la nécroptose, A20 contribue au maintien de l’homéostasie immunitaire et de l’intégrité tissulaire. Une dérégulation ou des variations entraînant une perte de fonction de **TNFAIP3** sont associées à des phénotypes inflammatoires exacerbés et ont été étudiées dans des contextes incluant l’auto-immunité, l’inflammation chronique et la signalisation du microenvironnement tumoral.
A20/TNFAIP3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNFAIP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNFAIP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNFAIP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNFAIP3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.