A1Up Double Nickase Plasmid (h): sc-407973-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das A1Up Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- A1Up Double-Nickase-Plasmid (h) und A1Up Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UBQLN4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: A1Up: sc-136145
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
A1Up Double Nickase Plasmid (h) | sc-407973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
A1Up Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBQLN4 (A1Up) kodiert ein ubiquitinähnliches Adapterprotein, das an der Proteostase beteiligt ist, indem es polyubiquitinierte Substrate mit Abbau- und Qualitätskontrollwegen koppelt. A1Up wird mit dem ubiquitinabhängigen Proteinumsatz in Verbindung gebracht und interagiert funktionell mit Komponenten des Ubiquitin-Proteasom-Systems sowie mit der autophagiegekoppelten Clearance, wodurch es die Protein-Homöostase unter basalen Bedingungen und bei Stress beeinflusst. Über diese Funktionen kann UBQLN4 zelluläre Antworten auf proteotoxischen Stress, Proteinaggregation und die Umgestaltung von Signalnetzwerken beeinflussen, die von einer regulierten Proteinstabilität abhängen. Eine Fehlregulation der ubiquitinvermittelten Proteinkontrolle ist für Neurodegeneration, Krebsbiologie und andere Krankheitsbilder breit relevant, bei denen eine gestörte Proteostase zur Pathologie beiträgt, wodurch UBQLN4 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien darstellt.
A1Up Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UBQLN4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UBQLN4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UBQLN4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UBQLN4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.