Plasmide CRISPR d'Activation (h) 53BP2: sc-403004-ACT

TP53BP2 code pour 53BP2 (également appelée ASPP2), une protéine adaptatrice multifonctionnelle qui module des programmes transcriptionnels régissant le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et les réponses au stress via des interactions avec les protéines de la famille p53 et d’autres partenaires de signalisation. 53BP2 contribue à la régulation des points de contrôle associés aux dommages de l’ADN et influence la dynamique du cytosquelette et des jonctions, ce qui peut affecter la polarité et la migration cellulaires. Un dérèglement de l’expression de TP53BP2 ou de ses réseaux d’interaction a été associé, dans divers contextes cancéreux, à une altération de la capacité apoptotique et de la signalisation des voies suppresseurs de tumeurs. En tant que régulateur nodal de la transcription dépendante de p53, TP53BP2 est fréquemment étudié afin d’élucider les mécanismes de stabilité du génome, de mort cellulaire programmée et de transformation oncogénique.

53BP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TP53BP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

53BP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TP53BP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TP53BP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 53BP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TP53BP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 53BP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 53BP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TP53BP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.